载体蛋白增强了Pichia pastoris中PR-39衍生的的表达
Minzhi Liu1,2, Yao Xiao3, Yan Yang1,2
1State Key Laboratory of Bioactive Substance and Function of Natural Medicines, Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing 100050, China.
Journal of applied microbiology
|December 5, 2023
概括
这项研究开发了一种基于酵母的系统,以产生PR-39衍生物 (PR-39-DP),一种富含proline的抗微生物 (PrAMP). 卡尔莫杜林 (CaM) 融合载体系统实现了更高的活性PR-39-DP产量,提供了对抗细菌感染的有希望的策略.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 微生物学 微生物学
- 蛋白质工程是指蛋白质工程.
背景情况:
- 多种药物耐药性使细菌感染治疗复杂化.
- 富含的抗微生物 (PrAMPs) 向细胞内细菌机制.
- 开发有效的抗微生物 (AMP) 是至关重要的.
研究的目的:
- 设计一种基于酵母的融合载体系统,用于表达PR-39衍生型 (PR-39-DP).
- 评估calmodulin (CaM) 和xylanase (XynCDBFV) 在Pichia pastoris.中作为PR-39-DP生产的载体.
- 评估表达的PR-39-DP的抗菌活性和产量.
主要方法:
- 使用Pichia pastoris用于融合蛋白的异质表达.
- 作为融合载体,使用了calmodulin (CaM) 和xylanase (XynCDBFV).
- 通过使用人类犀利病毒3C蛋白酶进行单步柱上消化,通过纯化PR-39-DP.
- 使用生长曲线和杀死试验评估了对大肠杆菌的抗菌活性.
主要成果:
- 在CaM聚变载体系统中,产量为1.0-1.2mg/L的PR-39-DP,大约是XynCDBFV系统的三倍.
- 纯化的PR-39-DP显示出抗菌活性,其最小抑制度 (MIC) 约为10.5μg/mL,对大肠杆菌具有抗菌作用.
- 融合蛋白增强了活性PR-39-DP的稳定性和分泌.
结论:
- 卡尔莫杜林 (CaM) 和西兰酶 (XynCDBFV) 有效地促进活性PR-39-DP的表达和分泌.
- 在实现PR-39-DP的更高产量方面,CaM聚变载体系统优越.
- 这种基于酵母的表达系统为生产抗菌来对抗细菌感染提供了一种可行的方法.
