可溶性IFN-λ1重组蛋白与寒冷冲击系统的 Prokaryotic 表达
Leiying Ren1, Xueqiong Meng2, Jie Sun1
1School of Basic Medical Science, Henan University of Science and Technology, Luoyang, China.
Protein expression and purification
|December 8, 2023
概括
再组合的人类干扰素-lambda1 (rhIFN-λ1) 通过冷冲击系统成功地在大肠杆菌中表达. 纯化的rhIFN-λ1显示出强大的生物活性,包括激活免疫路径和抑制子宫癌细胞生长.
科学领域:
- 生物化学 生化学
- 分子生物学分子生物学
- 免疫学 免疫学 免疫学
背景情况:
- 第三类干扰素 (IFN),特别是IFN-λ1,具有显著的抗病毒,抗瘤和免疫调节特性.
- IFN-λ是临床治疗策略的关键组成部分,通常单独使用或结合治疗.
- 生产高质量的,生物活性复合人体IFN-λ1 (rhIFN-λ1) 对于其治疗应用至关重要.
研究的目的:
- 开发一种有效的方法来表达和净化生物活跃的rhIFN-λ1.1.
- 描述纯化rhIFN-λ1的生物活性,包括其对细胞信号传递和癌细胞增殖的影响.
主要方法:
- 构建了pCold-II-IFN-λ1表达等离子体.
- 在最佳的冷震条件下 (15°C,1μg/L IPTG,12h) 在BL21(DE3) 大肠杆菌中可溶性rhIFN-λ1的表达.
- 使用Ni-NTA亲属性染色学净化rhIFN-λ1并评估其生物活性.
主要成果:
- 在优化的条件下,可溶性rhIFN-λ1.1.的高水平表达得到了表达.
- 纯化的rhIFN-λ1有效地激活了JAK1-STAT1信号通路,并诱导了干扰素刺激基因 (ISG).
- rhIFN-λ1 证明了对子宫癌 HeLa 细胞生长和增殖的剂量依赖抑制.
结论:
- 在大肠杆菌中使用冷冲击表达系统成功表达和净化生物活性rhIFN-λ1.
- 纯化的rhIFN-λ1表现出强大的抗病毒和抗瘤特性,验证了其治疗潜力.
- 这项研究为 rhIFN-λ1.1 的大规模生产和临床应用提供了基础.
