从Hansenula polymorpha通过脉冲电场和酶预处理选择性提取重组膜蛋白
Valentina Ganeva1, Andreas Kranz2
1Biological Faculty, Department of Biophysics & Radiobiology, Sofia University, 8 Dragan Tzankov blvd, Sofia, 1164, Bulgaria. valentinaganeva@abv.bg.
Microbial cell factories
|December 9, 2023
概括
这项研究引入了一种新的方法,利用细胞通透,从酵母中恢复病毒膜蛋白,达到80%的纯度. 这种技术为蛋白质提取提供了一个比传统的细胞溶解更温和的替代方案.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质化学 蛋白质化学
背景情况:
- 再组合膜蛋白,包括包裹病毒样粒子 (eVLP) 的病毒支架蛋白,通常在酵母中以细胞内方式积累.
- 传统的恢复方法涉及机械细胞破坏和洗剂处理,这可能是苛刻的.
- 细胞透提供了一个更温和,更有选择性的替代品,用于细胞内产品的回收.
研究的目的:
- 开发和评估一种新的方法,用于从酵母中回收和部分净化完整膜蛋白.
- 为了研究细胞外透化作为一种替代机械溶解蛋白质提取的替代方案.
- 评估这种方法在恢复特定病毒膜蛋白的有效性,例如子乙型肝炎病毒小表面蛋白 (dS) 和其融合蛋白.
主要方法:
- 采用脉冲电场和化酶预处理的组合,用于酵母细胞包膜的透.
- 在连续流系统中使用单极矩形脉冲来实现不可逆转的等离子体膜透.
- 应用酸酶和迪三醇治疗以增强细胞壁透性,然后使用Triton X-100进行蛋白质溶解.
- 包括短时间加热和KSCN化,以提高蛋白质纯度.
主要成果:
- 在没有显著的细胞溶解的情况下,实现了超过50%的可溶性宿主蛋白的释放.
- 通过使用开发的方法,成功地溶解并释放了3xL2-dS和dS的显著部分.
- 达到高达80%的蛋白质水平纯度的目标病毒膜蛋白.
- 证明了在不同酵母菌株和不同融合蛋白中恢复dS的方法的适用性,尽管有效性各不相同.
结论:
- 介绍了一种新的替代方法,用于恢复和部分净化Hansenula polymorpha表达的病毒膜蛋白.
- 突出了细胞包膜透的潜力,并结合了用于更温和,更有选择性的蛋白质提取的特定治疗方法.
- 讨论了影响该程序有效性的因素,以及它在恢复其他整体膜蛋白的更广泛潜力.
