在选择性氨酸标记中,对人性化抗可卡因mAb h2E2进行了新型的部分减少

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 免疫学 免疫学 免疫学
• 化学生物学 化学生物学

背景情况:

• 单克隆抗体 (mAbs) 对于疾病治疗,研究和开发至关重要.
• 对mAbs的共价标记对于诸如抗体药物联体等应用至关重要.
• 目前的氨酸残留物标记方法缺乏选择性,可能会损害抗体功能.

研究的目的:

• 开发一种新的,选择性的方法来减少和标记单克隆抗体 (mAbs).
• 调查使用三素-3,3',3′′-三硫酸 (TPPTS) 进行选择性抗体二硫化物降解.
• 评估选择性标签对抗体结构和抗原结合能力的影响.

主要方法:

• 使用TPPTS或TCEP-agarose在抗可卡因mAb (h2E2) 中选择性减少二硫化键.
• 用一种对氨酸有反应的光试剂对减少的抗体进行标记.
• 使用SDS-PAGE,差异扫描度测量 (DSF) 和异热定位热量测量 (ITC) 的表征.

主要成果:

• 在温和的条件下,TPPTS使抗体二硫化物的可重复,有限和选择性减少成为可能.
• 选择性减少主要针对重链到轻链二硫化物键,每mAb产生约2个标签.
• 标签没有影响抗体结构或抗原结合亲和力,DSF和ITC证实了这一点.

结论:

• 建立了一种方便,可重复和选择性的方法来进行部分抗体二硫化物减少和标记.
• 这种新的方法保持了抗体的完整性和抗原结合功能.
• 该方法对抗体修饰和用于治疗和实验用途的结合mAbs的开发具有显著的潜力.