生成一个新的sgRNA向量,pGL3-U6-sgRNA-PGK-mRFP-T2A-PuroR,以改善基编辑
1Center for Molecular and Cellular Biosciences, School of Biological, Environmental, and Earth Sciences, University of Southern Mississippi, Hattiesburg, Mississippi 39406, United States of America.
概括
研究人员开发了一个新的CRISPR/Cas9基编辑工具. 这种增强的sgRNA表达向量包括光和抗生素耐药性标记物,以便在基因编辑实验中更好地监测和选择细胞.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 基因编辑技术的技术
背景情况:
- 通过CRISPR/Cas9基编辑,可以实现精确的DNA点突变.
- 目前的sgRNA载体缺乏用于同时进行细胞监测和丰富的双重标志物.
- 这限制了编辑细胞的有效选和选择.
研究的目的:
- 为CRISPR/Cas9基编辑设计一种新的sgRNA表达向量.
- 将光和抗生素耐药性标记物结合到一个等离子体中.
- 为了促进传染细胞的同时监测和选择.
主要方法:
- 通过插入mRFPcDNA和T2A链接器修改了pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin向量.
- 使用DNA测序验证构造完整性.
- 利用新的载体 (pGL3-U6-sgRNA-PGK-mRFP-T2A-PuroR) 在RBL-2H3细胞中进行基编辑.
主要成果:
- 成功生成了一个双标记者sgRNA表达向量,pGL3-U6-sgRNA-PGK-mRFP-T2A-PuroR.
- 两种mRFP光和胺素耐药性标记物都有效地起作用.
- 在Munc13-1基因中成功生成了停止子.
结论:
- 新的双标记矢量增强了CRISPR/Cas9基编辑工作流.
- 允许同时可视化和选择编辑的单元格.
- 代表了CRISPR技术武器库的一个有价值的工具.


