在羊体外炎症模型中,首次了解细胞外囊泡-miRNA的表征
Maria Giovanna Ciliberti1, Antonella Santillo1, Agostino Sevi1
1Department of Agriculture, Food, Natural Resources, and Engineering (DAFNE), University of Foggia, Foggia, Italy.
Frontiers in veterinary science
|December 11, 2023
概括
与超离心法 (UC) 相比,试剂方法 (REA) 提供了从绵羊血液中超细胞囊泡 (EV) 和其微RNA (miRNA) 载荷的优异隔离. REA提高了EV纯度和miRNA产量,确定miR-26a-5p是炎症解决的关键调节者.
科学领域:
- 兽医科学 兽医科学 兽医科学
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 细胞外囊泡 (EVs) 和它们的微RNA (miRNA) 含量是生物过程中的关键调节剂,对兽医应用越来越感兴趣.
- 了解EV隔离技术及其miRNA配置文件对于推进动物健康的诊断和治疗策略至关重要.
研究的目的:
- 为了比较超离心 (UC) 和基于试剂 (REA) 的方法,从绵羊外周血液单核细胞 (PBMC) 超水体中分离EV.
- 在由脂聚糖 (LPS) 诱导的*体外*炎症条件下,鉴别出孤立的EVs的miRNA配置文件.
主要方法:
- 绵羊PBMC被分离和培养,随后使用UC和REA方法进行EV隔离.
- EV的表征包括CD81+标记物检测,纯度评估 (EV数量/蛋白质度) 和形态分析 (大小,形状).
- 使用Illumina NextSeq测序进行miRNA分析,通过生物信息学工具进行差异表达分析.
主要成果:
- 与UC相比,REA方法在羊EV隔离中被证明是可靠的,产生更高的恢复率,纯度以及增强的miRNA数量和表达.
- 在LPS挑战后,UC隔离的EV显示了11个差异表达的miRNA (8个上调,3个下调).
- 经REA分离的EVs表现出一个独特的miRNA配置文件,有29个分别表达的miRNA (8个上调,21个下调),突出了miR-26a-5p在炎症解决中的潜在作用和let-7miRNA家族的存在.
结论:
- REA方法是一种优秀的技术,用于隔离高质量的EV,并从绵羊PBMC超水体中表征它们的miRNA载荷.
- 在UC和REA方法之间,EV-miRNA配置文件显著不同,特别是在炎症刺激下.
- miR-26a-5p和let-7 miRNA家族被确定为绵羊EVs中炎症和免疫反应的关键调节者.
