在体外应激的可翻译性,用于预测生物治疗药物上的除氧化和氧化生物转化

科学领域:

• 生物制药学分析分析
• 蛋白质治疗药物 蛋白质治疗药物
• 质谱测量质量谱测量

背景情况:

• 单个残留物修饰,如蛋白质疗法中的脱化和氧化,可以导致疗效降低,药物动力学发生变化,毒性或免疫性增加.
• 准确识别和描述这些体内降解途径是生物制剂药物发现中的关键未满足需求.
• 现有的体外压力测试 (例如,PBS用于脱化,AAPH用于氧化) 用于预测制造和储存负债,但其体内翻译性仍然不太清楚.

研究的目的:

• 引入和验证基于质谱的工作流程,以在药理学上相关的组件内对蛋白质治疗药物中的in vivo氧化和脱化进行表征.
• 评估常见的体外氧化和脱氧化应激试验的体内可翻译性.
• 评估开发的质谱工作流程的准确性和精度,以量化蛋白质降解.

主要方法:

• 开发一个质谱工作流程,以在1-100μg/ml的度下在子和子血清/血中表征in vivo氧化和脱化.
• 评估工作流偏差 (<10%),精度 (%CV <8%),序列覆盖率 (∼85%) 和方法诱导的工件 (≤6%).
• 在体外压力测试预测 (PBS,AAPH,过氧化物) 与在体内观察到的多种蛋白质疗法降解的比较.

主要成果:

• 质谱学工作流显示了低偏差和高精度,用于量化相关药理动力学范围内的降解.
• 在六种不同的蛋白质疗法中观察到一种强烈的体外-体内相关性,用于除化.
• 在体外AAPH氧化应激试验显示11个分子的体内翻译性很差,其中一个案例显示出假阳性和假阴性预测;过氧化应激也取得了有限的成功.

结论:

• 开发的质谱工作流程是一个强大的工具,用于在生物体中对蛋白质疗法的除和氧化进行表征.
• 试管体内除氧化试验显示出预测体内负债的前景,而试管体内氧化试验,特别是AAPH压力,在预测体内行为方面的预测能力方面需要高度谨慎.
• 需要进一步的研究来改进体外方法,以预测生物制品中的体内氧化降解途径.