工程大肠杆菌菌株使用抗生素耐药性基因免费等离子体
Matthew B Amrofell1, Sunaina Rengarajan2, Steven T Vo1
1Department of Energy, Environmental and Chemical Engineering, Washington University in St. Louis, St. Louis, MO 63130, USA.
Cell reports methods
|December 12, 2023
概括
我们开发了一种新的克隆方法,使用抗生素耐药性无基因等离子体 (ARGFPs) 和双重选择策略. 这种方法确保了工程细菌中的高效等离子体维护,减少了抗生素耐药性基因的传播.
科学领域:
- 微生物学 微生物学
- 合成生物学 合成生物学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 基于抗生素耐药性基因 (ARGs) 的克隆存在横向基因转移的风险.
- 工程细菌菌株对于益生菌应用至关重要.
- 需要有效和安全的基于等离子体的克隆方法.
研究的目的:
- 开发一种基于抗生素耐药性无基因等离子体 (ARGFP) 的克隆的可通用管道.
- 建立一个双重选择策略,用于在工程化大肠杆菌菌株中构建和维护质粒.
- 为了证明这种方法在常见的实验室和益生菌底盘中的实用性.
主要方法:
- 采用了基于双重辅食基因和基本基因的选择策略.
- 在工程化大肠杆菌DH10B克隆菌株中构造的塑体.
- 在大肠杆菌Nissle 1917和大肠杆菌MG1655.5中选择和维护的等离子体.
主要成果:
- 实现了与传统抗生素耐药基因基因方法相匹配的克隆效率.
- 在双击Nissle和MG1655菌株中证明易于转化.
- 通过重复培养和实体小鼠肠道研究,在工程Nissle菌株中证实了长期的等离子体维持.
结论:
- 开发的基于ARGFP的克隆管道是高效的和可通用的.
- 这种方法最大限度地降低了抗生素耐药性通过水平基因转移传播的风险.
- 工程化大肠杆菌尼斯尔菌株适合在各种应用中长期维护等离子体,包括益生菌开发.
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