在Actinobacillus succinogenes中开发高效和特定的基编辑器,以增强酸生产

科学领域:

• 合成生物学 合成生物学
• 代谢工程是代谢工程.
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 从可再生资源生产生物糖酸 (SA) 为化石燃料提供了一个可持续的替代方案.
• 糖原菌 (Actinobacillus succinogenes) 是SA生产的关键微生物,但缺乏用于改进的先进遗传工具.
• 代谢工程的努力对于提高SA产量和工艺效率至关重要.

研究的目的:

• 为Actinobacillus succinogenes开发和描述新的基础编辑工具.
• 应用这些基因编辑器进行向基因修改以改善SA生产.
• 研究特定载体在SA生物合成和运输中的作用.

主要方法:

• 通过将Cas9尼克酶与除氨酶 (CBE,ABE,Td-GABE,Td-CBE) 融合,构建基编辑器 (BEs).
• 在A. succinogenes中对单个和多重编辑的基础编辑效率的评估.
• 细胞因子基编辑器的应用,使编码糖和SA转运器的基因失活.

主要成果:

• 开发了ABE和Td-CBE,可实现高达100%的编辑效率,用于A-to-G和C-to-T转换.
• 证明了ABE (100%的效率在六个站点) 和Td-CBE (10%的效率在两个站点) 的多重编辑能力.
• 糖糖运输体 (Asuc_0914) 的非活性化增加了SA产量,而SA运输体的非活性化 (Asuc_0715,Asuc_0716) 减少了它.

结论:

• 开发的基础编辑器为A. succinogenes的基因操纵提供了强大的工具.
• 有针对性的运输器失活可能会对SA生产产生重大影响.
• 这些进步具有很大的潜力,可以通过代谢工程来优化A. succinogenes,以实现可持续的化学生产.