改进了Bst聚合酶和逆转录酶生产的协议,并应用于护理点诊断系统
Lucas Rodrigo de Souza1,2, Italo Esposti Poly da Silva1,2,3, Gabriele Celis-Silva1,2
1Center for Molecular Biology and Genetic Engineering (CBMEG), Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP), Campinas/SP 13083-875, Brazil.
Experimental biology and medicine (Maywood, N.J.)
|December 13, 2023
概括
研究人员优化了酶用于反转录循环中介异热放大 (RT-LAMP),提高了诊断能力. 这些稳定,高纯度的酶对于在护理地点设置中敏感检测病毒遗传物质至关重要.
科学领域:
- 分子诊断学 分子诊断学
- 生物技术是生物技术.
- 传染病的准备 传染病的准备
背景情况:
- 随着COVID-19的流行,人们越来越需要快速和可扩展的诊断方法来应对公共卫生紧急情况.
- 像RT-qPCR这样的传统方法在资源有限的环境中面临限制.
- 反转录循环介导的同热放大 (RT-LAMP) 已成为敏感核酸检测的有希望的替代方案.
研究的目的:
- 为了改善RT-LAMP测定关键酶的产生和稳定性.
- 为了优化酶净化,提高效率和保持活性.
- 为了验证优化RT-LAMP系统的性能,在一个点的护理格式.
主要方法:
- 针对*Bst*聚合酶和*HIV*逆转录酶的优化蛋白质生产协议.
- 评估了不同的蛋白质标签和简化了净化程序.
- 在60天内在不同温度 (4°C和25°C) 下评估了酶的稳定性.
- 在便携式设备上使用临床样本测试了一步RT-LAMP反应.
主要成果:
- 通过优化生产和净化,实现RT-LAMP酶的高纯度和保存活性.
- 在常见的储存温度下,在60多天内表现出显著的酶稳定性.
- 证实了一步RT-LAMP反应的可靠性与临床样本在护理设备的点.
结论:
- 改进的生产和净化策略产生稳定和活跃的RT-LAMP酶.
- 优化的RT-LAMP系统为护理点应用提供了灵敏和可靠的诊断工具.
- 这种方法有可能在检测各种传染病原体方面得到更广泛的应用.
