使用CRISPR库的piggyBac转位子输送进行突变模型的并行工程
Xander Nuttle1, Nicholas D Burt2, Benjamin Currall2
1Center for Genomic Medicine and Department of Neurology, Massachusetts General Hospital, Boston, MA, USA; Department of Neurology, Harvard Medical School, Boston, MA, USA; Stanley Center for Psychiatric Research, Broad Institute, Cambridge, MA, USA; Program in Medical and Population Genetics, Broad Institute, Cambridge, MA, USA.
Cell reports methods
|December 13, 2023
概括
我们使用piggyBac转位子开发了一个CRISPR-Cas9系统,用于快速,大规模的细胞基因组变异工程. 这使得发育和疾病中突变的有效功能研究成为可能.
科学领域:
- 基因组学就是基因组学.
- 分子生物学分子生物学
- 基因工程是一种基因工程.
背景情况:
- 大型队列研究和新技术的进步加速了变种的发现.
- 基因变异的功能性特征对于了解疾病机制至关重要.
- 细胞中的并行基因组编辑和诱导多能干细胞 (iPSC) 是重要的研究工具.
研究的目的:
- 开发一种可扩展的方法,用于并行基因组工程.
- 为功能基因组学研究创建同源细胞模型.
- 促进对生物过程中的众多基因功能和突变的研究.
主要方法:
- 在piggyBac (PB) 转位子系统中整合CRISPR-Cas9指导RNA库和可诱导Cas9.
- 在同源细胞背景中对数十到数百个基因组变异进行并行工程.
- 使用插入/删除 (indels) 和副本数变体 (CNVs) 进行功能丧失研究,并对特定的核酸变化进行主要编辑.
主要成果:
- 展示了各种基因组变异的高吞吐量生成方法.
- 能够在同位素背景下并行创建多个突变模型.
- 建立了一个可扩展的平台,用于创建具有工程突变的细胞集合.
结论:
- 开发的方法显著加速了高质量的突变模型的建立.
- 这项技术将催化比较功能基因组研究.
- 促进对基因和突变在发育和疾病进展中的作用的研究.


