一个改进的对Matrigel双重试验的协议:测量视网膜血管生成的方法
Kathleen C Brown1, Reagan S Light1, Kushal J Modi1
1Department of Biomedical Sciences, Joan C. Edwards School of Medicine, Marshall University, Huntington, WV, 25755 USA.
Bio-protocol
|December 14, 2023
概括
马特里格尔双重检测模型视网膜神经血管疾病,如糖尿病视网膜病变和与年龄有关的黄斑变性. 这种测试有效地测量了药物 (如PP2) 对视网膜微血管内皮细胞的抗血管效应.
科学领域:
- 眼科医生 眼科 眼科
- 细胞生物学 细胞生物学
- 生物医学工程 生物医学工程
背景情况:
- 视网膜的神经血管疾病,包括糖尿病视网膜病变 (DR) 和与年龄相关的黄斑变性 (AMD),由于异常的血管生长导致视力丧失.
- 传统的血管新生测试不能准确地模仿视网膜中发生的特定血管新生过程.
- 视网膜血管生成涉及新的血管生长到非透的区域,导致视力受损.
研究的目的:
- 引入和验证Matrigel双重试验 (MDA) 作为视网膜血管生成的模型.
- 评估MDA在测量化合物的抗血管性活性方面的有用性.
- 使用MDA,研究Src激酶抑制剂PP2对人类视网膜微血管内皮细胞 (HRMEC) 的作用.
主要方法:
- 马特里格尔双重试验涉及将HRMEC种植在含红的马特里格尔层中,然后覆盖一个不含红的马特里格尔层.
- 在24小时内,HRMECs从初级迁移到二级Matrigel层,模仿血管发芽.
- 使用相对比显微镜可视化血管发芽,并使用ImageJ软件量化.
主要成果:
- MDA成功地模拟了与视网膜神经血管疾病相关的血管毛细血管的迁移.
- 该研究表明,MDA能够测量HRMEC中Src激酶抑制剂PP2的血管生成抑制活性.
- 结果表明,PP2在视网膜血管生成的背景下具有抗血管性质.
结论:
- 马特里格尔双重检测是研究视网膜血管生成和查抗血管新生药物的宝贵工具.
- 与传统测试相比,MDA提供了一个更具代表性的视网膜病理血管生成模型.
- 这种测试可以用于研究视网膜血管生成中的生长因子活性和信号通路.
