经过基因校正的RAG2-SCID人类造血干细胞恢复V(D) J重组酶并拯救淋巴细胞缺乏症

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 基因治疗 基因治疗
• 造血干细胞生物学 造血干细胞生物学

背景情况:

• 重组激活基因 (RAG1和RAG2) 对于V(D) J重组至关重要,对适应性免疫至关重要.
• 在RAG基因的缺陷导致严重的综合免疫缺陷 (SCIDs),往往需要血液细胞移植 (HCT).
• 目前的HCT方法有局限性,包括移植失败和免疫复合不完全.

研究的目的:

• 评估基于CRISPR/Cas9的基因纠正在人类造血干细胞/原生细胞 (HSPC) 中RAG2位点的可行性.
• 评估RAG2缺乏细胞中V(D) J重组的恢复和随后的淋巴发育.
• 提供支持RAG2-SCID基因校正疗法的发展的数据.

主要方法:

• 针对健康捐赠者和RAG2-SCID患者的HSPC中的RAG2位点的CRISPR/Cas9基因校正.
• 对基因纠正后的V(D) J重组酶活性进行评估.
• 分析T细胞受体 (TCR) 谱和B细胞发育标记物的分析.
• 在体内拯救免疫细胞发育的评估.

主要成果:

• 在RAG2-SCID衍生的HSPC中成功恢复V(D) J重组酶活性.
• 培养TCRαβ和γδCD3+细胞,包括CD4+和CD8+淋巴细胞.
• 正常的TCR曲目特征和拯救B细胞发育与IgM表面表达.
• 观察到CD56bright自然杀手细胞的显著减少.

结论:

• 克里斯普尔/卡斯9基因校正是一种可行的方法,可以恢复HSPC中的RAG2功能.
• 这种基因校正策略有效地挽救RAG2缺陷细胞中的T细胞和B细胞发育.
• 这些发现支持了对RAG2缺乏SCID患者的基因校正疗法的潜力.