基于基于反转录循环介导的同热放大集群的反转录循环的开发,定期间隔的短平行列重复 Cas12a 对子Tembusu病毒的测试
Yangbao Ding1,2,3, Zhanhong Huang1, Xinbo Li1
1College of Veterinary Medicine, Guangdong Laboratory for Lingnan Modern Agriculture, South China Agricultural University, Guangzhou, China.
Frontiers in microbiology
|December 15, 2023
概括
一种新的CRISPR-Cas12a测定方法提供了一种简单,灵敏和特定的方法来检测特姆布苏病毒 (DTMUV). 这种快速检测方法非常适合临床现场应用,改善鸟类疾病诊断.
科学领域:
- 兽医病毒学 兽医病毒学
- 分子诊断学 分子诊断
- 鸟类传染病 鸟类传染病
背景情况:
- 特姆布苏病毒 (DTMUV) 是一种新兴的鸟类病原体,对产业产生重大影响.
- 目前的DTMUV检测方法如PCR,qPCR和RT-LAMP是复杂的,需要专门的设备,并且可以产生假阳性.
- 需要在临床环境中对DTMUV进行简化,敏感和特定的诊断测定.
研究的目的:
- 开发和验证一种用于快速,可在现场部署的DTMUV.检测的新型检测方法.
- 提高DTMUV诊断的特异性和敏感性,克服现有方法的局限性.
主要方法:
- 与CRISPR-Cas12a技术相结合的反转录循环介导同热放大 (RT-LAMP) 的开发.
- 针对DTMUV保存的"C"基因进行检测.
- 使用合成的病毒RNA,常见的鸟类病毒和临床样本 (毛巾和组织) 进行验证.
主要成果:
- 开发的RT-LAMP-CRISPR-Cas12a试验实现了DTMUV.L的低检测极限,即3个副本/μL.
- 该试验显示高特异性,没有观察到与其他流行禽类病毒的交叉反应.
- 该测试显示,与临床样本中的SYBR Green qPCR相比,100%的阳性和阴性预测一致.
结论:
- 该RT-LAMP-CRISPR-Cas12a测定提供了一个简单,敏感和特定的方法来检测DTMUV.
- 这种测定需要最小的设备 (恒温器水浴,蓝色/紫外线光透光器),使其适合临床现场使用.
- 该分析的高准确性支持其在常规DTMUV监测和诊断中的潜在应用.
