直接比较链切割蛋白酶IgdE和BdpK用于LC-MS基础的IgG1克隆造型
Danique M H van Rijswijck1,2, Albert Bondt1,2, Naomi de Kat1,2
1Biomolecular Mass Spectrometry and Proteomics, Bijvoet Center for Biomolecular Research and Utrecht Institute for Pharmaceutical Sciences, University of Utrecht, Padualaan 8, Utrecht 3584 CH, The Netherlands.
Analytical chemistry
|December 18, 2023
概括
与IgdE (FabALACTICA) 相比,一种新的蛋白酶BdpK (FabDELLO) 提供了人类IgG1抗体的更快,更公正的消化,用于克隆谱档案. 这一进步提高了抗体分析的速度和准确性.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 人类抗体由于克隆序列变异而表现出异质性.
- 像ELISA这样的当前定量方法无法解决克隆水平的抗体丰度.
- 之前的LC-MS方法使用IgdE (FabALACTICA) 来生成Fab片段以分析抗体克隆.
研究的目的:
- 评估BdpK (FabDELLO) 作为一种替代IgG1链切割蛋白酶,用于抗体谱的分析.
- 直接比较BdpK与IgdE的表现.
- 为了评估IgG1消化中的蛋白酶偏差.
主要方法:
- 利用液体染色学-质谱学 (LC-MS) 通过Fab片段来区分和量化抗体克隆.
- 在IgG1消化过程中使用链切割蛋白酶IgdE (FabALACTICA) 和BdpK (FabDELLO).
- 执行了使用电子转移解离来进行克隆身份验证的自上而下的蛋白质组学.
主要成果:
- IgdE和BdpK都从血样本中产生了非常相似的IgG1克隆谱.
- 与IgdE (∼16小时) 相比,BdpK的消化时间明显更快 (∼2小时).
- 两个蛋白酶都没有在分裂多克隆IgG1s时表现出可检测的偏差.
结论:
- BdpK (FabDELLO) 是IgG1链消化的一种有效和特定的蛋白酶.
- 对于IgG1谱系分析,BdpK比IgdE提供了相当大的时间优势.
- 由于其速度和缺乏偏差,BdpK是分析多克隆IgG1库的有希望的替代蛋白酶.
