猪:安全港湾着陆地点,用于斑马鱼的可繁殖和高效的转基因
Robert L Lalonde1, Harrison H Wells1, Cassie L Kemmler1
1University of Colorado, School of Medicine, Anschutz Medical Campus, Department of Pediatrics, Section of Developmental Biology, 12801 E 17th Avenue, Aurora, CO 80045, USA.
bioRxiv : the preprint server for biology
|December 18, 2023
概括
研究人员使用phiC31整合酶开发了斑马鱼转基因的新着陆地. 这种有针对性的方法大大减少了创造稳定的转基因斑马鱼系所需的资源和动物.
科学领域:
- 发展生物学 发展生物学
- 遗传学 遗传学 是一个
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 标准斑马鱼转基因依赖于随机集成,需要进行广泛的查.
- phiC31整合酶能够在其他模型生物中实现有针对性的整合,但缺乏经过验证的斑马鱼着陆地点.
研究的目的:
- 在斑马鱼中建立基于phiC31整合酶的转基因验证的基因组着陆点.
- 创建强大的工具,以减少努力和资源生成转基因斑马鱼系.
- 为了促进诸如增强剂发现和基因调控元件分析等应用.
主要方法:
- 使用CRISPR-Cas9将现有的基于Tol2的转基因转化为attP着陆点 (pIGLET).
- 两个登陆站点,pIGLET14a和pIGLET24b,被生成和测试.
- 光报告器,CreERT2驱动器和基因调控变异报告器被引入这些网站.
主要成果:
- 在斑马鱼中成功生成了两个验证的attP着陆点 (pIGLET14a和pIGLET24b).
- 实现了针对性转基因整合的25-50%的生殖系传播率.
- 证明了适用于增强剂发现和变异分析的可复制的记者表达模式.
结论:
- 建立了基于phiC31整合酶的验证着陆地点 (pIGLET),用于可再生的向斑马鱼转基因.
- 这些网站有助于许多应用,包括增强剂的发现和基因调节元素的研究.
- 显著简化了转基因斑马鱼系的生成.
