人类超级抗体对病毒RNA依赖RNA聚合酶,由修改的Sortase自我分裂细菌表面显示系统产生

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 病毒学 病毒学
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 依赖RNA的RNA聚合酶 (RdRp) 是抗病毒药物的保留目标,因为它在病毒复制中起着至关重要的作用,并且缺乏人类同类.
• 以前开发的细胞透抗体 (超级抗体),PEN-HuscFv34,对各种RNA病毒表现出广泛的疗效,但面临着来自细菌包容体的生产挑战.
• 大规模生产PEN-HuscFv34受阻于包含体的艰苦净化和重新折叠过程.

研究的目的:

• 开发一种修改后的Sortase自我切割方法,与细菌表面显示系统相结合,以高效地产生抗RNA病毒超级抗体.
• 为了克服PEN-HuscFv34超级抗体的传统包容体生产的局限性.
• 建立一种可扩展和精简的方法来生产功能性重组蛋白质.

主要方法:

• 改造了大肠杆菌BL21 (DE3) ΔA菌株,以显示一个融合蛋白,包括膜,Sortase蛋白酶和PEN-HuscFv34抗体.
• 在核聚变结构中使用Sortase裂变部位 (LPET↓G) 进行自我裂变.
• 通过在Sortase-cleavage缓冲器中化细胞,从细菌表面释放可溶性PEN-HuscFv34抗体.

主要成果:

• 成功地从分裂的细菌细胞的上游生物中生产和净化可溶性PEN-HuscFv34-6×His.
• 纯化的抗体保留了其原始的细胞透能力和广泛的抗RNA病毒活性.
• 修改后的细菌显示系统便于直接下游加工和净化.

结论:

• 组合的Sortase自切割和细菌表面显示系统提供了一种有效和修改的方法,用于生产功能性超级抗体来对抗RNA病毒RdRp.
• 这种系统适合大规模生产,并且与传统方法相比,简化了下游加工.
• 该方法可适应其他重组蛋白质的可溶性,自由折叠的生产.