进化膜相关的辅助蛋白种类,以改善腺相关病毒的产生
Adam J Schieferecke1, Hyuncheol Lee2, Aleysha Chen3
1Department of Molecular and Cell Biology, University of California, Berkeley, Berkeley, CA 94720, USA; California Institute for Quantitative Biosciences, University of California, Berkeley, Berkeley, CA 94720, USA.
Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy
|December 20, 2023
概括
研究人员通过进化膜相关辅助蛋白 (MAAP) 来增强腺相关病毒 (AAV) 的产生. 这一进步解决了基因疗法制造中的一个关键挑战,即改善临床应用的载体基因组输出.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 基因治疗 基因治疗
- 病毒学 病毒学
背景情况:
- 在不断扩大的基因疗法领域,大规模制造腺相关病毒 (AAV) 是至关重要的.
- 膜关联辅助蛋白 (MAAP),由AAV盖基因中的另一个开放的读取框架编码,与AAV退出有关,但其机制尚不清楚.
- 在AAV2中禁用MAAP减少了载体基因组的产生,强调了它的重要性.
研究的目的:
- 开发新的MAAP变种以提高AAV生产.
- 研究MAAP变异对载体基因组包装和分泌的影响.
主要方法:
- 创建了一个包含超过1x10^6个MAAP变体的库,并用AAV2-ΔMAAP封装剂进行了五轮包装选择.
- 用下一代测序来识别在选择的MAAP变体中的丰富突变.
- 对AAV2,AAV6和AAV9囊中GFP转基因包装的选择MAAP变异的功能影响进行了评估.
主要成果:
- 每一轮选择都逐渐增加了MAAP图书馆的总体标位和分泌载体基因组的比例.
- 下一代测序揭示了在选定的MAAP群体中丰富的特定突变模式.
- 一种选择的MAAP变体,具有误解突变和框架移动的C端域,在AAV2,AAV6和AAV9血清型中显著增强了GFP转基因包装.
结论:
- 进化选择可以产生MAAP变异,大大改善AAV生产.
- 工程MAAP变体有望提高基因治疗载体制造的效率.
- 这项工作为优化AAV生产系统以满足临床需求提供了一条途径.
