在Vibrio natriegens中通过使用CRISPR相关的转基因酶的LoxP介导进化进行染色体重组和修饰
Jiaqi Xu1,2, Yijie Sun2, Jianping Wu1,2
1Institute for Intelligent Bio/Chem Manufacturing, ZJU-Hangzhou Global Scientific and Technological Innovation Centre, Hangzhou, China.
研究人员使用CRISPR相关的转体酶 (CAST) 来有效地将LoxP位点插入Vibrio natriegens. 这使得通过LoxP介导进化 (CRaMbLE) 实现染色体重排和修改,确定了导致快速生长的关键片段.
科学领域:
- 合成生物学 合成生物学
- 基因组学就是基因组学.
- 微生物学 微生物学
背景情况:
- 染色体结构显著影响细胞表型.
- 通过LoxP介导的进化需要在体外人工染色体合成.
- 与CRISPR相关的转基因酶 (CAST) 提供了 in vivo LoxP 位点集成的潜力.
研究的目的:
- 开发一种CAST衍生工具,用于Vibrio natriegens多重基因组集成.
- 在野生型细菌菌株中建立一个LoxP介导的进化系统.
- 确定促进细菌快速生长的基因组区域.
主要方法:
- 利用CAST衍生的多重基因组整合工具在2天内在V. natriegens的8个位置插入货物基因.
- 在V. natriegens.的染色体2 (Chr2) 上引入了30个LoxP位.
- 采用CRE重组酶来诱导通过LoxP介导进化 (CRaMbLE) 的染色体重组和修改.
主要成果:
- 在V. natriegens.中成功证明了CRaMbLE.
- 确定了Chr2上约358kb的片段,负责快速生长的表型.
- 基因组测序证实了成功的整合和重组.
结论:
- 在V. natriegens中使用CAST和CRaMbLE开发了用于高效基因组工程的新工具.
- 确定了一个关键的基因组区域,与快速增长相关,没有先前的机械知识.
- 该方法有可能扩展到其他细菌物种,如大肠杆菌和B. subtilis.
更多相关视频
11:35Selection-dependent and Independent Generation of CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockouts in Mammalian Cells
Published on: June 16, 2017
11:12Determination of the Optimal Chromosomal Locations for a DNA Element in Escherichia coli Using a Novel Transposon-mediated Approach
Published on: September 11, 2017
相关概念视频
Homologous Recombination
Conservative Site-specific Recombination and Phase Variation
The recognition sites for Cre recombinase called LoxP...
CRISPR
CRISPR and crRNAs
The CRISPR-Cas system stores a copy of foreign DNA in the host genome and uses it to identify the foreign DNA upon reinfection. CRISPR-Cas has three different...
Overview of Transposition and Recombination
DNA-only Transposons
The donor site from where the transposon is excised is either degraded or...
