在临床例行中稳定,提取和分析尿细胞自由DNA (ucfDNA) 的挑战

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分子生物学分子生物学
• 在瘤学瘤学.

背景情况:

• 液体活检是癌症研究的关键工具,循环无细胞DNA (cfDNA) 是一个有前途的分析物.
• 尿液cfDNA研究较少见,原因是由于其快速降解和低度.
• 这项研究调查了在各种保存和储存条件下尿液中cfDNA的稳定性.

研究的目的:

• 评估不同尿cfDNA保存方法的有效性.
• 确定最佳的储存条件,以保持尿样中的cfDNA完整性.
• 评估保存对特定突变检测能力的影响 (EGFR T790M).

主要方法:

• 有特定突变的合成cfDNA (EGFR T790M) 被入聚合的尿样中.
• 用三种不同的缓冲器 (UAS,UCB,AlloU) 或没有缓冲器来保存样品.
• 在24小时内,在室温和4°C下进行储存评估,通过度测量量cfDNA量化,并通过ddPCR进行突变分析.

主要成果:

• 未保存的样本显示cfDNA完全降解,使得突变无法检测到.
• 稳定缓冲器表现出不同程度的cfDNA保护.
• 尿液分析剂稳定器 (UAS) 缓冲器在所有测试条件下提供了最有效的保存,允许成功检测突变.

结论:

• 保存缓冲器对于稳定尿路cfDNA至关重要.
• 最佳的储存条件对于可靠的尿液cfDNA分析至关重要.
• 无人驾驶系统缓冲器显示出对尿路cfDNA诊断的临床翻译的重大前景.