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Updated: Jul 7, 2025

Enhanced Genome Editing with Cas9 Ribonucleoprotein in Diverse Cells and Organisms

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Published on: May 25, 2018

一个高效的CRISPR/Cas9基因组编辑系统用于Ganoderma lucidum通过Ribonucleoprotein方法培养的菌株

Yi Tan¹, Xianglin Yu², Zhigang Zhang³

¹National Engineering Research Center of Edible Fungi, Institute of Edible Fungi, Shanghai Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 201403, China.

Journal of fungi (Basel, Switzerland)

|December 22, 2023

概括

这项研究优化了CRISPR/Cas9核糖蛋白 (RNP) 基因组编辑系统,实现了100%的准效率和 ura3 基因的高编辑率. 该系统可实现有针对性的繁殖和代谢调节.

科学领域:

分子生物学分子生物学
菌类学菌类学是指菌类学.
生物技术是生物技术.

背景情况:

CRISPR/Cas9是一种流行的基因组编辑工具.
рибо核蛋白 (RNP) 复合体比基于等离子体的系统具有优势,但报告的效率较低.
对于Ganoderma lucidum,需要有效的基因组编辑系统.

研究的目的:

开发和优化一种RNP介导的CRISPR/Cas9基因组编辑系统,用于Ganoderma lucidum.
为了提高编辑效率和目标在G. lucidum.
研究CRISPR/Cas9诱导的双链断裂后的DNA修复机制.

主要方法:

开发了一种RNP介导的CRISPR/Cas9系统,用于Ganoderma lucidum L1菌株.
使用含有5-酸 (5-FOA) 的选择性介质进行选择.
分析了基因编辑结果,包括插入,替代和DNA修复途径 (NHEJ和MMEJ).

主要成果:

在基因组编辑中实现了100%的准效率.
获得了高编辑效率的奥托丁5'-单酸脱碳酶 (ura3) 基因 (>35突变体/10^7原生体).
具有特征的DNA修复,其中94.4%的突变使用非同源端连接 (NHEJ) 和5.6%使用微同源介导端连接 (MMEJ).
成功编辑了其他G. lucidum基因 (cyp512a3,cyp5359n1).

结论:

优化的RNP-CRISPR/Cas9系统在Ganoderma lucidum基因组编辑方面非常有效.
这种系统促进了G. lucidum的有针对性的繁殖和合成代谢调节.
这项研究为G. lucidum. 的DNA双链断裂修复机制提供了洞察力.

关键词:

这就是CRISPR/Cas9的作用.这种植物叫做Ganoderma lucidum.基因组编辑基因组编辑核糖核蛋白质 (RNP) 是一种核糖核蛋白质.丁5′单酸脱碳酶基因 (ura3) 的发生.

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