路西法雷斯校准器使生物发光功率的绝对定量成为可能

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 生物技术是生物技术.
• 生物物理学的生物物理.

背景情况:

• 生物发光是一种酶催化反应,广泛用于监测生物过程,通常测量相对光变化.
• 蛋白质工程和化学的进步提高了生物发光系统的亮度和生物可用性,从而降低了检测水平和新的应用,如为细胞光化学提供动力.
• 目前的光度仪以相对单位测量生物发光,这阻碍了仪器间数据的比较和光输出的绝对量化.

研究的目的:

• 开发和验证在生物发光测试中绝对光子计数的发光溶液校准剂.
• 为了使生物发光系统的绝对功率测量能够对任何光度计进行校准.
• 建立一种标准化的方法,以绝对单位 (瓦特或每秒光子) 量化生物发光输出.

主要方法:

• 制造了一种定制的光检测装置.
• 波长匹配的LED光源 (450nm和561nm) 用于校准.
• 描述了NanoLuc和火虫光酶溶液的绝对光输出.

主要成果:

• 确定NanoLuc luciferase的绝对输出功率为3.72 × 10-18瓦特/分子.
• 火虫 luciferase 的绝对输出功率被确定为 7.25 × 10-20 瓦特/分子.
• 这些校准器的商用组件可以在2-5分钟内产生稳定的生物发光信号.

结论:

• 发光溶液校准剂可以实现生物发光的绝对功率测量.
• 这种方法允许对任何光度计进行校准,以进行绝对光子计数.
• 生物发光的标准化绝对量化将改善数据的可比性,并允许新的应用.