开发优化的细胞毒性测试,以评估CAR-T细胞的抗瘤潜力
Misa Eugene-Norbert1, Alexis Cuffel2, Gaetan Riou1
1Univ Rouen Normandie, Inserm UMR1234, FOCIS Center of Excellence PAn'THER, Rouen F-76000, France.
Journal of immunological methods
|December 26, 2023
概括
化学抗原受体 (CAR) -T细胞疗法显示出前景,但需要特定的测试. 这项研究开发了一种使用小鼠细胞的新型,高度特异的CD19 CAR-T细胞功效测定方法,避免了对精确评估的全活性.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 细胞疗法细胞疗法
- 癌症研究 癌症研究
背景情况:
- 化学抗原受体 (CAR) -T细胞疗法,特别是CD19 CAR-T细胞,已经改变了血液恶性瘤的治疗方法.
- 目前使用人类细胞系 (例如,Nalm-6) 的细胞毒性测定可以显示CD19独立杀死因alloreactivity.
- 这种局限性需要开发更具体,更可靠的方法来评估CAR-T细胞功能.
研究的目的:
- 开发一种优化的细胞毒性试验,以评估具有增强特异性的CD19 CAR-T细胞功效.
- 利用小鼠细胞来消除与人类细胞系观察到的全活性反应.
- 建立一个敏感和特定的测试来评估CAR-T细胞功能.
主要方法:
- 使用逆转录病毒载体,工程化小鼠NIH/3T3 (3T3) 和EL4细胞系以表达CD19和/或eGFP.
- 同培养的CD19CAR-T细胞和非转化 (NT) 控制T细胞与工程化小鼠细胞.
- 使用光显微镜和流式细胞计评估细胞毒性,将结果与基于阻抗的测试进行比较.
主要成果:
- 设计成表达CD19的小鼠细胞 (3T3-GFP,EL4-GFP) 允许CD19的CAR-T细胞进行特定的杀死,与CD19阴性细胞不同.
- 没有观察到与小鼠目标的全反应性,CD19独立的杀死,证实了试验特异性.
- 光显微镜和流细胞计测试表明灵敏度与阻抗基方法相比,并确定了CAR-T细胞干细胞类型的记忆表型.
结论:
- 工程化小鼠3T3-GFP或EL4-GFP细胞作为有效的,评估CD19CAR-T细胞功效的具体目标.
- 光显微镜和基于流细胞计的测试为CAR-T细胞功能评估提供了敏感,特异性和无基活性的工具.
- 这种优化的测定方法提高了CAR-T细胞功效评估在研究和临床环境中的可靠性.
