开发一种方法来确定核酸酸酶c的酶活性,使用水友相互作用液体色谱
L A Shaposhnikov1, N Yu Chikurova1, A V Chernobrovkina2
1Bach Institute of Biochemistry, Federal Research Centre "Fundamentals of Biotechnology" of the Russian Academy of Sciences, Leninsky Avenue, 33-22, Moscow 119071, Russia; Chemistry Department, Lomonosov Moscow State University, Leninskie Gory, 1-3, Moscow 119991, Russia.
Journal of chromatography. A
|December 28, 2023
概括
研究人员开发了一种更快的方法来测量核糖核酶C (RihC) 酶活性. 这种新的水友互动液态色谱 (HILIC) 方法比以前的方法快五倍,可以进行高效的动力学研究.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 酶学 是一种酶学.
- 分析化学 分析化学
背景情况:
- 核糖核酸酸酶C (RihC) 将核糖核酸分解成基和核糖.
- 目前用于测量RihC活性的方法,如逆相HPLC,耗时.
- 由于基质和产品吸收光谱的重叠,光谱光度分析不适合.
研究的目的:
- 为了从Limosilactobacillus reuteri中获得重组RihC.
- 开发一种快速有效的方法来确定RihC酶活性.
- 为了描述RihC介导的尿液裂变的动力学.
主要方法:
- 在大肠杆菌中基因克隆和RihC的表达.
- 开发一种新的水友互动液体色谱 (HILIC) 方法.
- 使用新的HILIC列,同时测定 uracil 和 uridine.
主要成果:
- 成功获得了复合RihC.
- 新的HILIC方法实现了高效率和短的保留时间 (0.9分钟的 uracil, 1.7分钟的尿素).
- 在酶动力学测量方面,HILIC方法比逆相HPLC快五倍.
结论:
- 为RihC活动评估建立了一个快速有效的HILIC方法.
- 这种方法显著减少了酶动力学研究所需的时间.
- 这些发现促进了对RihC和相关酶的更简化研究.
