相对光和电子冷显微镜工作流程结合了微纹,冰盾和室内光光显微镜

科学领域:

• 细胞和分子生物学 细胞和分子生物学
• 显微镜和成像技术技术.

背景情况:

• 在现场冷电子断层扫描 (cryo-ET) 提供了细胞机械的近原生超结构细节.
• 相对光和电子显微镜 (CLEM) 能够在细胞内进行向的分子可视化.
• 目前的冷-CLEM工作流程在吞吐量,样本产量和质量方面面临挑战.

研究的目的:

• 开发一个集成的,高吞吐量,精简的冷-CLEM协议.
• 克服现有的冷-CLEM方法的局限性.
• 为了提高细胞成像中的样品产量和效率.

主要方法:

• 利用PRIMO微模式来准确定位细胞和选择目标.
• 采用CERES冰盾,防止在冷聚焦离子束 (cryo-FIB) 研磨过程中受到冰污染.
• 集成的METEOR室内光显微镜用于有针对性的冷FIB削.
• 将这些技术结合到一个单一的冷-CLEM工作流程中.

主要成果:

• 实现了精确的细胞定位,并最大限度地提高了用于冷-FIB研磨的目标细胞.
• 在批量削过程中成功防止了片上的冰污染.
• 使用室内显微镜实现了细胞结构的高效,有针对性的研磨.
• 在总体样本产量,吞吐量和工作流程效率方面显著改善.

结论:

• 集成的冷-CLEM工作流程显著提高了效率和样品产量.
• 这种简化方法克服了以前在冷-ET和CLEM中的瓶.
• 合并的技术为高通量细胞超结构分析提供了一个强大的平台.