改进的细胞外囊泡的制造方法伪型与囊泡性口腔炎病毒糖蛋白
Juliette Champeil1,2,3, Mathias Mangion1,2,3, Rénald Gilbert3,4
1Chemical Engineering Department, Université Laval, 1065, Avenue de la Médecine, Pavillon Pouliot, Québec, QC, G1V 0A6, Canada.
Molecular biotechnology
|January 5, 2024
概括
我们开发了一种可扩展的方法,用于在无血清条件下生产显示VSVG (囊腔口炎病毒糖蛋白) 的细胞外囊泡. 这种优化的工艺和净化策略使这些有价值的配送车辆能够高效地生物制造.
科学领域:
- 生物技术和生物制造
- 细胞生物学和膀运输
背景情况:
- 细胞外囊泡 (EVs) 显示囊泡性口腔炎病毒糖蛋白 (VSVG) 是人类细胞系中核酸和蛋白质传递的有希望的.
- 目前用于EV-VSVG的生物制造方法难以扩展,限制了它们的治疗和研究应用.
研究的目的:
- 在无血清介质中开发EV-VSVG的第一个可扩展的生产工艺.
- 为EV-VSVG建立一个高效的净化协议,利用超离心和染色学.
- 优化生产参数,包括细胞密度,DNA度和DNA:聚乙烯胺 (PEI) 比率.
主要方法:
- 在无血清介质中利用基于聚乙烯胺 (PEI) 的HEK293悬浮细胞的短暂转化.
- 研究的生产参数:细胞密度 (3 × 10^6细胞/毫升),等离子体度 (2 μg/毫升) 和DNA:PEI比率 (1:4).
- 开发了一种两步净化工艺,包括低速离心,糖超离心和氨酸亲和色谱.
主要成果:
- 优化生产产生的最高标位为3×10^6细胞/毫升,2μg/毫升等离子体DNA,DNA:PEI比率为1:4.
- 传染后3天发生了最大VSVG产量;甲酸盐 (2mM) 添加了传染后18小时,提高了产量.
- 净化的EV-VSVG颗粒测量176.4±88.32nm,并显示91.4%的蛋白质与外体相似.
结论:
- 通过使用HEK293悬浮细胞成功开发了EV-VSVG的可扩展,无血清的生产工艺.
- 建立了一个高效的净化策略,结合了超离心和肝素亲和染色学.
- 优化的EV-VSVG生产和净化方法为这些配送车辆的大规模生物制造提供了基础.
