使用疏水性相互作用色谱学和质谱学对硫酸蛋白治疗药物的结构功能关系研究

科学领域:

• 生物化学 生化学
• 蛋白质化学 蛋白质化学
• 分析化学 分析化学

背景情况:

• 蛋白质氨酸硫化是一种在重组治疗蛋白中罕见地观察到的翻译后修饰 (PTM).
• 硫化引入负电荷,可能改变蛋白相互作用和抗原结合活性,从而构成关键质量属性挑战.
• 控制蛋白质氨酸硫化对于确保治疗抗体的有效性和安全性至关重要.

研究的目的:

• 开发和验证一种可靠的方法来分离和量化治疗双特异性抗体中不同程度的蛋白质氨酸硫化.
• 研究氨酸硫化对抗体结构功能关系的影响,特别是其抗原结合活性.
• 确定硫化氨酸为关键质量属性,并证明其控制的有效测定方法.

主要方法:

• 开发一种独特的疏水相互作用色谱 (HIC) 方法,用于高分辨率分离硫酸和非硫酸抗体物种.
• 利用质谱学和光结合免疫吸收试验 (FLISA) 对富含硫酸抗体变体的结构功能关系研究.
• 评估了HIC方法在控制与蛋白质氨酸硫化相关的关键质量属性的有效性.

主要成果:

• 开发的HIC方法实现了基于其硫化程度的抗体物种的基线分辨率,独立于其他PTM.
• 富含硫酸双特异性抗体物种,特别是那些在互补性决定区域 (CDR) 硫化,表现出与其同源抗原的结合减少.
• 在分离硫酸盐物种方面,HIC测定被证明是有效的,证实了它对控制这一关键质量属性的有用性.

结论:

• 治疗双特异性抗体中的铁酸硫化是一种关键的质量属性,可以对抗原结合活性产生负面影响.
• 开发的HIC方法是分离,量化和控制治疗性蛋白质中蛋白质氨酸硫化的一种强有力的工具.
• 严格控制铁二硫化是必要的,以保持重组抗体的理想的生物功能和治疗疗效.