疏水性相互作用染色体的选择性和分辨力 针对单克隆抗体变体的分离
Raphael Ewonde Ewonde1, Katharina Böttinger2, Jelle De Vos1
1Department of Chemical Engineering, Vrije Universiteit Brussel (VUB), Pleinlaan 2, 1050 Brussels, Belgium.
针对trastuzumab变种的疏水性相互作用色谱 (HIC) 方法开发是使用化物离子优化,以提高选择性. 这种方法通过了解保留机制,提高了不同形式的trastuzumab之间的分辨率.
科学领域:
- 生物制药学分析
- 染色学方法开发开发 染色学方法开发
- 蛋白质变异分析 蛋白质变异分析
背景情况:
- 了解疏水性相互作用染色体 (HIC) 中的保留和选择性对于分析像trastuzumab这样的蛋白质变体至关重要.
- 对于trastuzumab的方法开发需要精确控制染色学参数,以解决分子变异.
研究的目的:
- 为了研究对 HIC 中的保留和选择性的机制性理解,以便对 trastuzumab 变体进行分析.
- 确定关键的方法开发参数,以实现trastuzumab分子变异的染色学分辨率.
主要方法:
- 评估了三个列化学的保留特征:丁基,基胺和多基胺连接体.
- 研究了盐类型,特别是离子对色谱选择性的影响.
- 采用列合来最大限度地提高参考和氧化特鲁祖马布变体之间的分辨率.
- 使用液体染色学-质谱学 (LC-MS) /MS图用于特定地点的分析.
主要成果:
- 离子被确定为改善色谱选择性的主要驱动因素,观察到离子特异性效应.
- 多基胺列由于蛋白质间隔和固体效应而表现出增强的选择性.
- 列合有效地解决了trastuzumab样本中的分子变异.
- 移动相中的可以选择性检测特定部位的除化 (N30) 和氧化 (M255,W420,M431).
结论:
- 离子通过特定的离子-蛋白相互作用和固体效应显著提高HIC对trastuzumab变体分析的选择性.
- 使用化物和列合的优化HIC方法为特鲁苏马布分子变体提供了高分辨率.
- LC-MS/MS基映射证实了化物的有用性,用于识别trastuzumab的特定位点修饰.
更多相关视频
07:53Activated Cross-linked Agarose for the Rapid Development of Affinity Chromatography Resins - Antibody Capture as a Case Study
Published on: August 16, 2019
10:21Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification
Published on: September 21, 2011
相关概念视频
Affinity Chromatography
Types Of Column Chromatography
Gel Filtration Chromatography
When the...
Size-Exclusion Chromatography
Silica particles offer advantages such as rigidity,...
High-Performance Liquid Chromatography: Types of Detectors
High-Performance Liquid Chromatography: Introduction
In HPLC, two phases play a critical role in the separation process:
