用于定量化C9orf72人类病理学的验证试验

科学领域:

• 神经遗传学 神经遗传学
• 分子生物学分子生物学
• 生物标志物开发 生物标志物开发

背景情况:

• C9orf72基因重复扩张是前性痴呆症 (FTD) 和肌性侧面硬化症 (ALS) 的主要遗传原因.
• 缺乏可靠的工具来监测C9orf72基因,RNA和蛋白质,这阻碍了研究和临床应用.
• 经过验证的测定对于理解C9orf72的病理生物学和开发有效疗法至关重要.

研究的目的:

• 开发和验证用于量化C9orf72病理生物学在DNA,RNA和蛋白质水平的测试.
• 在FTD和ALS研究中建立可靠的方法来测量重复扩张和C9orf72产品.
• 支持对C9orf72相关的神经退行性疾病的发现研究和临床试验.

主要方法:

• 用单分子测序来准确测量C9orf72的重复扩张和位点变化.
• 滴滴数字PCR (ddPCR) 试验是为了量化C9orf72的转录变异而开发的.
• 西方斑块和MSD免疫测试用于验证C9orf72和二重复蛋白 (DPR) 的抗体.
• 淘汰人类诱导多能干细胞 (iPSC) 线作为测试验证的对照.

主要成果:

• 单分子测序精确大小和分阶段C9orf72重复扩张和检测出位点变化.
• 经过验证的ddPCR测定量化了主要的C9orf72转录变异.
• 通过Western blot验证了四种商业上可用的抗体,用于C9orf72蛋白质的量化;没有一个适合免疫细胞化学.
• 两种抗体组合在患者的iPSC运动神经元中显示出多GA和多GP DPRs的信号增加,在人类和小鼠脑组织中得到验证.

结论:

• 经过验证的DNA,RNA和蛋白质分析为C9orf72病理生物学评估提供了可靠的工具.
• 这些测定适用于FTD/ALS的基础研究和临床试验.
• 开发的方法有助于研究C9orf72相关的神经退行性疾病.