优化CRISPR/Cas-Mediated Knockout在区域完好无损的水牛生殖细胞中的电穿孔条件

科学领域:

• 动物生物技术动物生物技术
• 基因组学就是基因组学.
• 生殖生物学 生殖生物学

背景情况:

• 体细胞核转移和微注射是常见的,但对基因组编辑的农场动物来说效率低下.
• 在水牛中有效的基因组编辑对于农业的进步至关重要.

研究的目的:

• 为了优化CRISPR-Cas9电穿孔 (CRISPR-EP) 对于水牛生殖细胞.
• 为了为水牛胚胎建立高效的基因编辑条件.
• 评估POU5F1基因淘汰对水牛胚胎发育和多能性基因表达的影响.

主要方法:

• 在试验室生产水牛生殖器.
• 优化电穿孔参数 (电压,脉冲,时间) 的CRISPR-Cas9交付.
• 针对水牛POU5F1基因的目标淘汰.
• 对胚胎发育的评估 (裂变和胚胎细胞分裂率).
• 在POU5F1-Knockout胚胎中对多能基因表达 (SOX2,NANOG,GATA2) 的定量分析.

主要成果:

• 最佳的CRISPR-EP条件被确定为20V/mm,5脉冲,3毫秒在10小时后播种.
• 在不影响胚胎发育的情况下实现高POU5F1淘汰效率.
• POU5F1淘汰赛显著改变了胚胎囊中的SOX2,NANOG和GATA2的表达.

结论:

• 标准化了一种高效且可适应的CRISPR-EP协议,用于水牛生殖器.
• 这种方法有助于在水牛胚胎中进行功能基因组学研究.
• 在水牛生产中,CRISPR-EP为基因组编辑提供了一个有希望的替代方案.