设计一个CRISPR平台,以调节神经细胞前体细胞中髓状细胞白血病 (MCL-1) 的表达

科学领域:

• 干细胞生物学 干细胞生物学
• 基因编辑技术 基因编辑技术
• 发育生物学是发展生物学.

背景情况:

• 人类多能干细胞 (hPSC) 差异化模型促进了对人类发育的理解.
• 在hPSC分化中研究胚胎致命基因存在技术挑战.
• 在长期的分化研究中,CRISPRoff提供了可遗传的基因沉默.

研究的目的:

• 开发和验证一种修改后的CRISPRoff系统,用于稳定,可诱导的hPSC基因沉默.
• 为了使胚胎致命基因在体外分化过程中的研究.
• 为hPSC研究提供生成基因沉默工具的协议.

主要方法:

• 修改CRISPRoff和sgRNA睡眠美女转位子载体,以进行四环素控制的激活.
• 产生含有CRISPRoff和sgRNA转位子载体的稳定hPSC线.
• 该系统应用于从hESCs衍生出来的寡基细胞前体细胞中使MCL-1沉默.

主要成果:

• 实现了目标基因的稳定和遗传性沉默,包括必不可少的基因MCL-1.
• 该系统允许在特定的分化阶段进行基因沉默.
• 验证证明了MCL-1对于hPSC存活和寡细胞发育的必要性.

结论:

• 可诱导的CRISPRoff Sleeping Beauty转子体系统为研究hPSC分化中必不可少的基因提供了强大的工具.
• 这种方法促进了对人类发育的研究,特别是对小寡干细胞和造血干细胞的发育.
• 该协议可以在各种基于hPSC的分化模型中调查基因功能.