对于冷电子显微镜样本准备的斯特雷普塔维丁-亲和网格制造.
Trinity Cookis1, Paul Sauer2, Simon Poepsel3
1Department of Molecular and Cell Biology, University of California, Berkeley; trinity_cookis@berkeley.edu.
Journal of visualized experiments : JoVE
|January 15, 2024
概括
本研究介绍了一种制造斯特雷普塔维丁亲和网格的协议,通过防止变质和改善方向来增强冷电子显微镜 (cryo-EM) 样本准备. 这些网格简化了冷EM社区的样本处理.
科学领域:
- 结构生物学 结构生物学
- 生物物理学的生物物理.
- 显微镜的使用方法
背景情况:
- 低温电子显微镜 (cryo-EM) 在样本准备方面面临挑战,包括在空气-水界面的变性和定位问题.
- 目前的冷EM实验室由于缺乏商业可用性和复杂的制造,很少使用斯特雷普塔维丁亲和网格.
- 这些网格通过保护样品免受空气-水界面的影响,并帮助样品度提供解决方案.
研究的目的:
- 提供一个详细的,优化的协议,用于制造斯特雷普塔维丁亲和度网格.
- 为了使研究人员能够更容易地访问斯特雷普塔维丁亲和网格,用于冷EM和负染色实验.
- 通过故障排除指南来解决常见的制造挑战.
主要方法:
- 在生物化脂质单层上生长二维链胺晶体.
- 将单层直接应用于标准的空洞碳冷电磁电网.
- 采用高亲缘关系的斯特雷普塔维丁-生物素相互作用来进行样本结合.
主要成果:
- 建立了一个强大的制造斯特雷普塔维丁亲和网格的协议.
- 这些网格有助于生物化样品的结合,保护它们免受空气-水接口效应的影响.
- 该方法允许在网格上直接进行样本度和净化.
结论:
- 开发的协议使得能够稳定地制造链素亲和网格.
- 这些网格通过减轻常见问题,显著改善了冷EM样本的准备.
- 对于更广泛的冷EM研究社区来说,斯特雷普塔维丁亲和网的可访问性得到了增强.


