全基因组的CRISPR/Cas9查揭示了一种新的向ATF7IP-SETDB1复合体,用于增强难以表达的蛋白质生产
Su Hyun Kim1, Jong-Ho Park1,2, Sungwook Shin3
1Department of Biological Sciences, KAIST, Daejeon 34141, Republic of Korea.
ACS synthetic biology
|January 19, 2024
概括
确定新的目标来促进难以表达的生物治疗产量至关重要. 在CHO细胞中淘汰ATF7IP-SETDB1通过减少H3K9me3来提高蛋白质产量,从而改善转基因表达.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 新兴的生物治疗药物往往在高产量生产中存在挑战,原因是表达难度.
- 中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞被广泛用于生物制药制造,需要提高生产率的战略.
研究的目的:
- 识别用于增强难以表达 (DTE) 蛋白质,特别是双特异性抗体 (bsAbs) 生产的新型遗传标.
- 研究基因组甲基化在调节CHO细胞中转基因表达和蛋白质生产力的作用.
主要方法:
- 在bsAb生成的CHO细胞中使用光激活细胞分类 (FACS) 进行全基因组CRISPR淘汰选.
- 分析与H3K9me3介导的转录抑制相关的基因标,特别是ATF7IP和SETDB1.1.
- 评估细胞生长,蛋白质生产率,H3K9me3水平和基因干扰后的转基因表达.
主要成果:
- 屏幕确定ATF7IP和SETDB1是DTE蛋白质生产的关键调节者.
- 在bsAb生成的CHO细胞中,ATF7IP-SETDB1复合物的淘汰抑制了细胞生长,但提高了生产率高达2.7倍.
- 扰乱ATF7IP-SETDB1降低了H3K9me3水平,增加了转基因表达,并增加了多达3.9倍的单克隆抗体 (mAb) 生产,而不会影响产品质量.
结论:
- ATF7IP-SETDB1复合体是增强CHO细胞生物治疗性产生的一个有希望的目标.
- 向组织素甲基化通路,特别是H3K9me3,可以解锁转基因表达,并显著提高bsAbs和mAbs的产量.
- 全基因组的CRISPR查是一种有效的方法,用于识别新的标,以优化DTE蛋白的生物过程.
