通过异质表达,从一种耐药的Exiguobacterium分离物中改善性和溶剂稳定的蛋白酶的产生

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 酶学 是一种酶学.
• 微生物生物化学 微生物生物化学

背景情况:

• 型细菌是蛋白质酶的宝贵来源,在恶劣条件下具有固有的稳定性,如性pH值,高盐度和洗剂.
• 现有的来自本地类源的酶产量往往很低,下游加工复杂,导致需要改进的生产方法.
• 一个以前已确定的耐药细菌,Exiguobieterium sp. 已知TBG-PICH-001可分泌具有溶剂耐受性的蛋白酶.

研究的目的:

• 描述来自Exiguobacterium sp.的两个蛋白酶基因 (rsep金属蛋白酶和tpa血清蛋白酶) 的异质表达. TBG-PICH-001.1.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.002.001.001.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.002.
• 为了提高生产产量,并描述这些重组蛋白酶的特性,以实现潜在的工业应用,特别是作为洗剂添加剂.

主要方法:

• 两个蛋白酶基因rsep和tpa被克隆到pET 22b+等离子体载体中.
• 再组合等离子体在埃舍里希亚大肠杆菌BL21(DE3) 主体细胞中得到表达.
• 再组合蛋白酶使用Ni-NTA亲和染色法进行净化,并以酶特性,稳定性和基质特异性进行特征化.

主要成果:

• 再组合蛋白酶rsep和tpa在大肠杆菌中成功表达,分别产生6.3和6.7 IU/mg,与原生蛋白酶相比增加了11-12倍.
• 纯化的酶在46KDa (rsep) 和32KDa (tpa) 的表面分子量下表现出可溶性表达.
• 蛋白酶在广泛的性pH范围内 (7-10),在表面活性剂,金属离子,洗剂和疏水溶剂的存在下表现出稳定性,K_m值为392μM (rsep) 和301μM (tpa) 对于素.

结论:

• 异质表达显著增加了蛋白酶产量,克服了本地生产的局限性.
• 具有特征的重组蛋白酶在与洗剂配方相关的条件下表现出卓越的稳定性和活性.
• 这些发现突显了RSP和TPA蛋白酶作为洗剂行业有效和稳定的添加剂的潜力.