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Updated: Jul 5, 2025
07:56
Genome Editing in Mammalian Cell Lines using CRISPR-Cas
Published on: April 11, 2019
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通过CRISPR/Cas9技术在一个永生的人类细胞系中进行单基基因编辑的策略
Alda Corrado1, Romina Aceto1,2, Simona Miglietta3
1Department of Biology, Genetic Unit, University of Pisa, Via Derna 1, 56126 Pisa, Italy.
3 Biotech
|January 23, 2024
概括
在人类甲状腺细胞中优化CRISPR/Cas9基因编辑需要比较传递方法和Cas9策略. 具有特定供体载体的双尼克酶系统实现了高效的内置,而标准的CRISPR/Cas9在基因内置方面表现出色.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 基因编辑技术的技术
背景情况:
- 对于基因编辑应用,CRISPR/Cas9技术已经迅速发展.
- 像甲状腺细胞这样的体细胞中有效和精确的基因编辑仍然是一个挑战,特别是在传递和非目标效应方面.
研究的目的:
- 为了优化人类甲状腺细胞 (Nthy-Ori细胞系) 中的单核酸多态编辑.
- 评估基因编辑的不同传递方法 (lentivirus,化学脂质) 和Cas9策略 (双链断裂与单链断裂诱导).
- 为了比较敲门和敲门效率的策略.
主要方法:
- 用于传递CRISPR/Cas9组件的lentivirus和化学脂质.使用CRISPR/Cas9组件.
- 采用标准的Cas9核酶用于双链断裂 (DSB) 和修改的Cas9用于单链断裂 (SSB).
- 通过使用单链供体寡核酸或HR410-PA供体载体进行敲定,并进行化学转染.
主要成果:
- 双尼克酶系统和化学转染的HR载体的组合产生了所需的细胞,表明HR途径偏好悬浮断裂.
- 标准的CRISPR/Cas9系统,诱导粗的DSB,更有效地通过插入/删除 (in/del) 突变对基因敲除.
- 化学转化被证明是有效的提供双尼克酶系统的敲进.
结论:
- 双尼克酶CRISPR/Cas9系统适合在永生Nthy-Ori甲状腺细胞系中进行敲入应用.
- 标准的CRISPR/Cas9系统是有效的基因淘汰,产生在/del突变.
- 优化传递和Cas9策略对于人类体细胞中高效和特定的基因编辑至关重要.
