从人血清中提升单克隆抗体的亲和力净化,用于随后的CZE-MS分析

科学领域:

• 分析化学 分析化学
• 生物制药学分析
• 蛋白质组学是指蛋白质组学.

背景情况:

• 毛细电泳质谱 (CE-MS) 性能受到复杂的生物样本矩阵的阻碍.
• 精确量化和表征治疗性蛋白质,如血清中的单克隆抗体 (mAbs),具有挑战性.
• 现有的CE-MS方法需要强大的样本准备,以可靠地分析复杂的生物流体.

研究的目的:

• 开发和评估基于亲和力净化为人类血清中的因弗利西马布的样品准备程序.
• 为了使随后的蛋白质分解和CE-MS/MS分析能够进行量化和翻译后修饰 (PTM) 特性.
• 评估开发的协议与复杂血清样本的CE-MS/MS分析的兼容性和性能.

主要方法:

• 从人血清中提取mAb的三个不同的亲和力净化策略的开发和优化.
• 评估样本准备步骤与CE-MS/MS分析的兼容性.
• 使用优化协议评估mAbs的绝对量化和PTM的表征.

主要成果:

• 开发的样本准备协议允许使用CE-MS/MS.量化血清样本中的mAbs到0.2μg·mL−1 (2.03nM).
• 实现了对PTM热点的一致表征和修改水平的估计.
• 该研究归因于样品制备步骤对电泳分离的影响,并证明了CE-MS/MS对复杂矩阵的更好的适用性.

结论:

• 基于亲和性净化的样本制备显著提高了CE-MS/MS的适用性,用于分析复杂的生物矩阵,如人体血清.
• 开发的协议允许对治疗性mAbs及其PTM进行敏感的量化和详细的描述.
• 优化样本准备对于扩大CE-MS/MS在生物制药分析和临床应用中的实用性至关重要.