激活CRISPR以表征易于访问的细胞中的拼接改变变异
Thorkild Terkelsen1, Nanna Steengaard Mikkelsen2, Ebbe Norskov Bak3
1Department of Clinical Genetics, Aarhus University Hospital, Aarhus, Denmark; Department of Biomedicine, Aarhus University, Aarhus, Denmark.
American journal of human genetics
|January 25, 2024
概括
克里斯普尔激活 (CRISPRa) 能够在皮肤细胞中实现基因表达,用于研究遗传变异. 这种新型的ex vivo拼接测试有助于诊断基因不在可访问组织中的遗传性疾病.
科学领域:
- 遗传学 遗传学 是一个
- 分子生物学分子生物学
- 诊断发展 诊断发展
背景情况:
- 影响mRNA拼接的遗传变异会导致遗传性疾病.
- 很难预测变体的拼接性.
- 目前的RNA诊断仅限于在可访问的组织中表达的基因.
研究的目的:
- 开发一种使用CRISPR激活 (CRISPRa) 的新型ex vivo拼接试验.
- 为了使在可访问的组织中不表达的基因中的拼接改变变异的功能性特征.
- 为单一性疾病建立一个新的诊断工具.
主要方法:
- 通过dCas9-VPR mRNA传递平台激活CRISPR (CRISPRa).
- 在皮肤纤维细胞中诱导基因表达.
- 使用RT-PCR,下一代测序和长读测序进行拼接变异分析.
- 在髓蛋白零 (MPZ) 和斯帕斯丁 (SPAST) 基因中变异的特征.
主要成果:
- 克里斯普拉成功上调皮肤纤维细胞中的MPZ和SPAST转录.
- 该试验使得详细的拼接变体概况成为可能.
- 证明了基于CRISPRa的基因诊断原则的证明.
结论:
- 克里斯普拉是一种有前途的工具,用于激活变异影响研究可访问的细胞中的基因表达.
- 这种方法克服了当前对不可访问的基因组织的RNA诊断的局限性.
- 这种程序对于诊断实验室来说是实用的.
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