定义一种优化的工作流程,用于利用细胞内标记物丰富和分析残留瘤群体

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 癌症研究 癌症研究
• 一个单细胞分析.

背景情况:

• 瘤复发是由耐治疗的残留癌细胞驱动的.
• 丰富这些罕见的细胞进行分析是具有挑战性的,特别是使用细胞内标记物.
• 目前的方法通常集中在表面标记物上,限制了细胞内特征的深度分析.

研究的目的:

• 为了证明丰富B细胞淋巴瘤2 (BCL2) 高种群的可行性,作为t(14;18) +淋巴瘤的替代标记物.
• 建立一个强大的细胞制备协议,用于细胞内生物标志物分析和细胞丰富.
• 用单细胞分类技术研究罕见的残留瘤细胞的新的工作流程.

主要方法:

• 评估了对抗体表达和RNA完整性的各种固定协议,确定了glyoxal固定为优越的.
• 使用细胞内BCL2过度表达检测用于t(14;18) + B细胞丰富.
• 使用cellenONE F1.4单细胞分类平台,精确隔离高表达BCL2细胞.
• 在经过排序的,粘素固定细胞上进行了转录组分析.

主要成果:

• 素固定对表面/细胞内表达和RNA质量产生最小的影响.
• 成功检测并丰富BCL2高表达B细胞.
• 排序的细胞产生了优质的测序库.
• 固定细胞的单细胞转录特征显示与活细胞的高度一致.
• 工作流在低蜂输入场景中表现出有效性.

结论:

• 成功开发了一种概念验证工作流程,该流程结合了针对细胞内标记物的强大的细胞制备与单细胞丰富.
• 这种方法为稀少细胞检测和丰富提供了基于滴滴技术的替代方案.
• 该工作流具有在泛癌环境中研究残留细胞的巨大潜力,有助于预后和治疗策略.