通过多重复的双记者策略对病毒颗粒上的表面蛋白质表皮层进行分析
Maryam Sahi1, Sarah Andersson1, Cecilia Mattson1
1Affinity Proteomics-Stockholm Unit, SciLifeLab, Division of Affinity Proteomics, Department of Protein Science, School of Engineering Sciences in Chemistry, Biotechnology and Health (CBH), KTH Royal Institute of Technology.
Journal of visualized experiments : JoVE
|January 29, 2024
概括
这项研究提出了一种新型的流动细胞计量试验,用于检测完整的严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2 (SARS-CoV-2) 病毒颗粒. 该方法使用多重技术同时分析多个表面蛋白质表位,帮助抗病毒和疫苗开发.
科学领域:
- 病毒学 病毒学
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 包裹病毒利用表面膜蛋白来执行关键的功能,如细胞附着,融合和致病性.
- 病毒表面蛋白是开发抗病毒药物和疫苗的关键目标.
- 准确检测完整的病毒颗粒对于理解病毒行为和开发对策至关重要.
研究的目的:
- 描述一种新的双报告器流量细胞计协议,用于在完整的SARS-CoV-2颗粒上研究表面蛋白质.
- 通过独立的亲和反应来证明复合技术的三重检测病毒颗粒的能力.
- 验证测试对检测病毒表面蛋白质表位体及其潜在应用的性能.
主要方法:
- 使用磁珠与复合性人类血管酶转化酶-2 (ACE2) 相结合,捕获SARS-CoV-2病毒颗粒.
- 采用双报告器流细胞计系统,使用R-phycoerythrin (PE) 和Brilliant Violet 421 (BV421) 标记的检测试剂.
- 应用的抗体碎片针对不同的Spike (S1) 蛋白质表位,用于概念验证.
主要成果:
- 实现了高特异性的病毒颗粒的三重检测,证实了完整的SARS-CoV-2的捕获.
- 生成的剂量依赖曲线具有良好的测定性能 (复制系数差异<14%).
- 证明了两个不同的病毒表面蛋白质表位体的并行检测.
结论:
- 开发的流细胞测量协议使包裹病毒表面蛋白质的高复数,高通量分析成为可能.
- 该试验可可靠地检测活跃的,完整的病毒颗粒,并评估抗体/抗病毒药物的特异性.
- 这种方法具有超越SARS-CoV-2的应用潜力,包括其他细胞外囊泡和生物颗粒.
