在HMC3细胞系中选择适合基因表达研究的基因参考基因,采用定量实时RT-PCR

科学领域:

• 神经科学是一个神经科学.
• 免疫学 免疫学 免疫学
• 遗传学 遗传学 是一个

背景情况:

• 微质细胞是中枢神经系统中的关键免疫细胞,与神经炎症和帕金森病 (PD) 等疾病有关.
• 在微质模型中精确的基因表达分析对于理解PD病变发生和识别治疗点至关重要.
• 人类微质克隆3 (HMC3) 细胞系为研究人类微质提供了一个有价值的体外模型.

研究的目的:

• 在正常和炎症前条件下,在HMC3细胞中确定定量RT-qPCR的稳定基因.
• 评估参考基因选择对基因表达结果的统计学意义的影响,在与PD相关的环境中 (氨酸治疗).

主要方法:

• 使用定量RT-qPCR分析HMC3细胞中十个候选参考基因的表达.
• 使用多种算法 (∆C_T方法,BestKeeper,Normfinder,geNorm,RefFinder) 来评估基因的稳定性.
• 最多和最不稳定的基因被用来使感兴趣的基因正常化,比较结果.

主要成果:

• HPRT1,RPS18和B2M被确定为在促炎性刺激下HMC3细胞中最稳定的参考基因.
• 参考基因的选择显著影响了基因表达变化的统计学意义,特别是经过轮治疗后.

结论:

• 这项研究为HMC3细胞在促炎状态中的第一个参考基因验证,确定了HPRT1,RPS18和B2M作为可靠的内部控制.
• 利用这些经过验证的参考基因将提高神经炎症和神经退行性研究中的基因表达研究的可靠性和可重复性,包括帕金森病.