来自哺乳动物细胞系的内源性ISGylated蛋白质的定量鉴定议定书
Christopher P Wardlaw1, Matthew M Miele2, Zhuoning Li2
1Molecular Biology Program, Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, New York, NY 10065, USA.
STAR protocols
|January 31, 2024
概括
这项研究引入了一种新的协议,通过标记内源ISG15.5来识别ISG化蛋白. 这种方法最大限度地减少了假阳性,并避免了ISG15过度表达,以获得准确的结果.
科学领域:
- 生物化学 生化学
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
背景情况:
- 类似于乌比奎丁的蛋白质ISG15通过ISGylation对细胞功能至关重要.
- 现有的识别ISGylated蛋白质的方法通常涉及ISG15过度表达,导致潜在的错误阳性.
研究的目的:
- 提出一种精细的协议,用于识别ISGylated蛋白.
- 为了最大限度地减少错误的阳性结果,并避免与ISG15过度表达相关的问题.
主要方法:
- 标记内源性ISG15. 的标记.
- 基因型和克隆选择.
- 诱导ISGylation和隔离ISGylated蛋白质. 这是一个很好的方法.
- 通过定量质谱法进行识别.
主要成果:
- 一个用于识别ISGylated蛋白质的协议,减少了假阳性.
- 成功标记了内源性的ISG15.
- 证明ISGylation诱导和蛋白质隔离的方法.
结论:
- 本协议提供了一种更可靠的方法来识别ISGylated蛋白质.
- 这种方法提高了ISGylation研究的准确性.
