使用丰富珠子与有限消化相结合的宿主细胞蛋白质分析
Sisi Zhang1, Hui Xiao2, Ning Li1
1Analytical Chemistry, Regeneron Pharmaceuticals Inc.
Journal of visualized experiments : JoVE
|February 5, 2024
概括
这项研究提出了一个用户友好的协议,用于丰富宿主细胞蛋白质 (HCP) 并使用蛋白质丰富珠去除单克隆抗体 (mAbs). 该方法实现了超过7000倍的HCP丰富,使药品安全的敏感检测成为可能.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分析化学 分析化学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
背景情况:
- 宿主细胞蛋白 (HCP) 是治疗性蛋白质产品中的关键杂质,即使在低度下也存在潜在风险.
- 准确识别和量化医疗保健人员对于药物安全和监管合规至关重要.
- 现有的HCP检测方法通常需要敏感的缩策略来克服低丰度的挑战.
研究的目的:
- 从治疗性蛋白质样本中开发和验证一种用户友好的协议,用于从治疗性蛋白质样本中丰富低丰度宿主细胞蛋白 (HCP).
- 为了同时去除单克隆抗体 (mAbs),以提高HCP检测灵敏度.
- 建立一种使用液态染色体质谱法 (LC-MS) 检测HCP的高度敏感方法.
主要方法:
- 利用商业上可用的蛋白质组丰富珠,其中包含多种类型的六联体库,用于HCP丰富.
- 实施了有限的消化协议,然后使用纳米液体色谱-质谱/质谱 (LC-MS/MS) 进行检测.
- 在LC-MS分析之前开发了一种整合HCP丰富和mAb去除的协议.
主要成果:
- 实现了 7000 倍以上的宿主细胞蛋白质 (HCP) 丰富.
- 建立了一个低至0.002ppm的检测极限,用于HCP.
- 在NIST mAb参考标准中成功检测了850名高可靠性医疗人员.
- 展示了一个用户友好的协议,并提供了实施视频演示.
结论:
- 开发的协议提供了一个高度敏感和有效的方法来丰富和检测低丰度的医疗保健人员.
- 这种方法显著提高了治疗性蛋白质药物产品风险评估的准确性.
- 该协议的用户友好性和高灵敏度有助于在生物制药质量控制中采用该协议.
