用基因编码的指标对病毒感染的人类肠道器官单层的活成像
J Thomas Gebert1, Francesca J Scribano1, Kristen A Engevik1
1Alkek Center for Metagenomics and Microbiome Research, Department of Molecular Virology and Microbiology, Baylor College of Medicine.
Journal of visualized experiments : JoVE
|February 5, 2024
概括
这项研究提出了一种可视化人类肠道器官 (HIO) 中信号的新方法. 这种技术使研究人员能够更好地了解肠道细胞的功能和对刺激的反应.
科学领域:
- 胃肠病学 胃肠病学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 生物物理学的生物物理.
背景情况:
- 信号调节关键的肠功能,包括分泌,炎症和干细胞增殖.
- 了解肠道上皮质中的动态是解读恒温过程和对刺激的反应的关键.
- 人体肠道器官 (HIOs) 为研究肠道表皮生物学提供了一个强大的,来自人类的模型.
研究的目的:
- 建立一个稳定转换HIOs与遗传编码指标 (GECI) 的协议.
- 为了使实时光显微镜和数据分析能够在HIO中表征信号.
- 提供一个可适应的管道,用于在HIO中调查蜂信号.
主要方法:
- 人类肠道器官 (HIOs) 被用lentivirus转化,以表达GCaMP6s,一种基于绿色光蛋白的细胞质GECI.
- 工程HIO被分散成单层,分化,然后感染轮状病毒或用刺激的药物治疗.
- 现场光显微镜使用带有现场成像室的光显微镜进行,随后使用ImageJ软件进行数据分析.
主要成果:
- 在HIO中GCaMP6s的稳定表达允许可视化信号动态.
- 该协议使得在轮状病毒感染或药物治疗后,HIO单层中反应的长期成像成为可能.
- 开发的管道成功地表征了细胞信号,以应对各种刺激.
结论:
- 这项工作建立了一个多功能和适应性管道,用于表征人类肠道有机体中的信号.
- 该协议使用人类衍生模型促进了肠表皮内细胞功能和反应的研究.
- 这种方法提供了对肠道内恒温过程和疾病机制的宝贵见解.
