化循环你的网格:深入玻璃化和重复使用切割的网格,以推进cryoEM民主化
Viacheslav Serbynovskyi1, Jing Wang1, Eugene Yd Chua1
1Simons Electron Microscopy Center, New York Structural Biology Center, NY, NY, USA.
bioRxiv : the preprint server for biology
|February 8, 2024
概括
由于昂贵的供应,CryoEM的民主化受到阻碍. 克里奥循环方法使得可靠的涂抹,玻璃化和再利用切割的冷EM网格用于净化蛋白质和细胞样本,降低成本.
科学领域:
- 结构生物学 结构生物学
- 生物物理学的生物物理.
- 低温电子显微镜 低温电子显微镜
背景情况:
- 低温电子显微镜 (CryoEM) 对生物分子的高分辨率结构确定至关重要.
- 专用耗材的高成本,特别是用于冷,限制了CryoEM的广泛采用.
- 有效的样本准备对于成功获取CryoEM数据至关重要.
研究的目的:
- 为了引入和验证可重复的cryoEM网格准备的CryoCycle方法.
- 为了证明剪切的冷EM电网的成本效益和可重复使用性.
- 扩大CryoCycle的适用于纯化蛋白质和细胞样本的范围.
主要方法:
- 开发CryoCycle技术,用于剪切和重复使用标准的cryoEM网格.
- 优化使用纯化蛋白质对剪切网的抹杀和结协议.
- 应用CryoCycle用于玻璃化金,预先剪切的网格上的细胞薄片.
- 在多种样本制备中评估玻璃冰质量和网格可重复使用性.
主要成果:
- 在切割的网格上使用液态乙冷成功地进行净化蛋白质的玻璃化.
- 对不同蛋白质样本的相同切割网格的多次成功重复使用的演示.
- 在金,预先剪切的网格上进行薄细胞区域的玻璃化,适合冷电子断层扫描.
- 持续生产高质量的玻璃体冰,使 CryoEM 成像成为可能.
结论:
- CryoCycle提供了一种具有成本效益和可持续的方法来准备cryoEM样本.
- 该方法通过减少对昂贵的,一次性供应的依赖来民主化对CryoEM的访问.
- 低温循环是一种适用于各种生物样本的多功能技术,包括纯化的蛋白质和细胞.
