在质谱分析中用二标记异和异胺酸
Masaru Miyagi1, Evan Kiesel1, Kelao Neumbo1
1Department of Pharmacology, Case Western Reserve University, 10900 Euclid Avenue, Cleveland, Ohio 44106-4988, United States.
一种新的标记方法精确地识别了蛋白质中的异酸 (isoAsp). 这一突破克服了现有技术的局限性,提供了一种可靠的方法来检测isoAsp和与之相关的修改,如异黄酸.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
- 化学生物学 化学生物学
背景情况:
- 异酸 (isoAsp) 是一种普遍存在的蛋白质修饰,由阿斯巴拉金/亚斯巴拉丁酸脱/异化引起.
- 这种修改与各种疾病有关,但目前的检测方法缺乏特异性和广泛适用性.
- 现有的isoAsp识别技术往往含糊不清,在研究中没有得到广泛采用.
研究的目的:
- 开发一种新的,高度特定的方法来识别蛋白质中的异酸位.
- 克服当前模两可和较少采用的isoAsp.检测技术的局限性.
- 为研究isoAsp在健康和疾病中的作用提供一个强大的工具.
主要方法:
- 开发了一种 (D2O) 标签策略,针对由isoAsp.sp.形成的独特zolone中间体.
- 利用质谱法来比较标记在H2O与D2O中的蛋白质的质量,从而实现特定地点的合体检测.
- 应用该方法对蛋白质 (lyszyme, rituximab) 进行建模,以证明其有效性和特异性.
主要成果:
- 这种新的方法通过通过oxazolone环形成和racemization通过合体的结合来明确识别isoAsp位点.
- 用D2O标记的的质谱分析精确地定位了含有的ISOAsp残留物.
- 该方法在模型蛋白质上证明了有效性,并证实了l-和d-isoAsp以及异黄酸 (isoGlu) 的标签.
结论:
- 一种用于检测isoAsp的新型,特定的标签方法已经成功开发和验证.
- 这种技术在识别isoAsp修饰的现有模两可的方法上提供了显著的进步.
- 该方法检测isoAsp和isoGlu的能力为生物化学和生物医学研究提供了宝贵的新工具.
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