无血小板血的高通量微流体提取用于微RNA和细胞外囊分析

科学领域:

• 生物标志物发现发现
• 微流体学 微流体学
• 细胞外囊泡 细胞外囊泡

背景情况:

• 无细胞RNA和细胞外囊泡 (EVs) 是重要的液体活检生物标记物,但易受分析前的变化.
• 目前的隔离方法,如离心,可以引入不一致性和血小板污染.
• 为了可靠的生物标志物分析,需要标准化,高通量隔离.

研究的目的:

• 开发一种高通量,无标签的惯性微流体装置 (ExoArc),用于隔离无血小板的血和EVs.
• 为了减少分析前的变异性,并提高分离生物标志物的产量和纯度.
• 为了验证该设备在癌症和代谢疾病诊断中的临床应用.

主要方法:

• 使用了一种新型惯性微流体装置 (ExoArc),具有500纳米的切断距离,用于差异横向迁移和粒子分离.
• 进行了无血小板血的单步隔离,与离心法相比,减少了与血小板相关的miRNA污染.
• 结合ExoArc与大小排除色谱 (SEC) 进行高效的EV隔离,并与RT-qPCR集成用于miRNA分析.

主要成果:

• ExoArc实现了亚微米尺寸的切断,有效地去除白细胞,红细胞,血小板和碎片.
• 使用ExoArc识别的7-miRNA小组显示,对检测非小细胞肺癌的灵敏度为~90%.
• 使用ExoArc+SEC的EV隔离比超离心法高出约10倍,在T2DM受试者中观察到不同的miRNA配置文件.

结论:

• ExoArc为等离子体和EV隔离提供了一个无离心,自动化的工作流程,最大限度地减少了分析前的变化.
• 该设备能够发现敏感的生物标志物,并有可能用于点诊断诊断.
• ExoArc促进了电动汽车制造和高级转录组学分析的质量控制.