选择性疏水相互作用色谱,用于超绕的DNA质粒的高纯度
Klemen Božič1, Ajda Sedlar1, Špela Kralj1
1Sartorius BIA Separations d.o.o., Ajdovščina, Slovenia.
Biotechnology and bioengineering
|February 14, 2024
概括
一种新的疏水性相互作用色谱法选择性地净化超卷化等离子体DNA (pDNA),这对于基因疗法和疫苗至关重要. 这种可扩展的技术提高了生物制药制造的pDNA质量.
科学领域:
- 生物制药制造业 生物制药制造业
- 分子生物学分子生物学
- 染色体学 染色体学 是一种染色学.
背景情况:
- 超卷等离子体DNA (SC pDNA) 的高纯度对于基因治疗载体,pDNA疫苗和mRNA合成至关重要.
- 目前的方法,如性溶解和离子交换染色学有效地去除污染物,但努力区分SC和开放循环 (OC) pDNA异型.
- 基因组DNA (gDNA) 也在实现高纯度pDNA方面提出了挑战.
研究的目的:
- 为SC pDNA开发一种新的,可扩展的,兼容GMP的抛光净化方法.
- 为了实现SC异型对OC pDNA和gDNA的高选择性.
- 提高pDNA在关键生物制药应用中使用的质量.
主要方法:
- 开发一种水相互作用色谱 (HIC) 方法,利用一个丁单质柱.
- 使用硫酸,一种宇宙热带盐,在特定度下选择性地结合SC pDNA.
- 利用流通去除OC的pDNA和gDNA.
主要成果:
- 该HIC方法显示了SCpDNA丰富的高选择性.
- 该技术在各种等离子体大小 (312 kbp) 中是通用的,并且可扩展到至少300 mg.
- 达到>95%的SC pDNA纯度,有效地去除OC pDNA和gDNA污染物.
结论:
- 开发的基于HIC的净化是一种强大的,可扩展的解决方案,用于生产高纯度的SCpDNA.
- 这种方法显著提高了pDNA的质量,pDNA是基因组药物的关键原料.
- 这种方法为加强先进生物制药的生产铺平了道路.
