在大米细胞中通过CRISPR和内源性αAmy3促进体的高产BMP2表达

科学领域:

• 植物生物技术 植物生物技术
• 分子生物学分子生物学
• 蛋白质表达方式 蛋白质表达方式

背景情况:

• 植物细胞对于生产重组蛋白质非常有价值.
• αAmy3促进体是一种内源性大米促进体,具有基因表达的潜力.

研究的目的:

• 评估内源性αAmy3促进剂在米细胞中表达人类骨形态遗传蛋白2 (hBMP2m) 的疗效.
• 优化CRISPR/Cas9介导的基因插入技术,以提高蛋白质的生产.

主要方法:

• 通过CRISPR/Cas9介导,将rhBMP2m插入米中的αAmy3内突1中以子为目标.
• 产生同位合和异位合的 rhBMP2m 敲进米悬浮细胞系.
• 分析rhBMP2m表达,蛋白质产量,糖化,二聚体形成和生物活性.

主要成果:

• 使用完善的CRISPR/Cas9技术实现了13.5%的转换效率.
• 同卵性细胞系产生21.5μg/mL的rhBMP2m (1.03%的可溶性蛋白质总量),在糖耗尽时上调调节.
• 来自大米的rhBMP2m表现出糖化,二聚体形成和生物活性,在两代人中表达稳定.

结论:

• 米内源性αAmy3促进剂对生物活性制药蛋白如hBMP2m.m.的高产量生产有效.
• 开发的CRISPR/Cas9系统使得植物蛋白质表达的有效和稳定的基因修饰成为可能.
• 这种基于植物的表达系统为制造治疗性蛋白质提供了一个有前途的战略.