一种新的方法,通过sfGFP标签在Bacillus subtilis中产生高水平的蛋白质谷氨酸酶
Zheng Zhang1, Yuxi Li1, Lihui Zheng1
1School of Life Science, East China Normal University, Shanghai 200241, PR China.
International journal of biological macromolecules
|February 14, 2024
概括
超级文件绿色光蛋白 (sfGFP) 增加了Bacillus subtilis中的蛋白质谷氨酸酶 (PG) 分泌. 这种新的策略显著提高了PG的生产,并提供了一种表达困难蛋白质的新方法.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 酶工程是什么? 酶工程是什么?
- 蛋白质表达方式
背景情况:
- 蛋白质谷氨酸酶 (PG) 是一种去胺酶酶,增强了食物蛋白质的功能.
- 之前的PG重组表达在Corynebacterium glutamicum中使用双氨酸转位 (Tat) 途径产生了26U/mg的最大活性.
研究的目的:
- 开发一种高效的异质表达和分泌系统,用于Bacillus subtilis中的蛋白谷氨酸酶 (PP).
- 研究使用超绿色光蛋白 (sfGFP) 作为N端融合标签来增强PG分泌.
- 通过推动者和RBS工程来优化PG生产.
主要方法:
- 通过在Bacillus subtilis中用sfGFP替换传统的信号,构建了一个融合蛋白 (sfGFP-PP).
- 在发酵过程中监测sfGFP-PP分泌动力学.
- 优化促进体和核糖体结合点 (RBS) 序列,以进一步增强PG表达.
主要成果:
- sfGFP-PP融合蛋白在细胞外分泌,在28小时达到峰值表达,分泌效率为93%.
- 与传统信号 (11.9 U/mL) 相比,N端 sfGFP 融合增加了PG 表达的约2.2 倍 (26 U/mL).
- 促进剂和RBS优化进一步提高了PG酶活性,达到36.9U/mL.
结论:
- sfGFP 作为一种有效的 N-终端标签,用于增强 Bacillus subtilis 中蛋白质谷氨酸酶的细胞外分泌.
- 这一策略提供了一种强大的方法来增加PG和其他难以表达的分泌蛋白质的产生.
- 优化的系统为食品工业应用的酶生产提供了显著的进步.
