一个自组装分裂的基于纳米露西法酶的试验,用于研究Pseudomonas注射器效应因子分泌物

科学领域:

• 微生物学和分子植物病理学

背景情况:

• 格拉姆阴性病原体利用III型分泌系统 (T3SS) 将效应蛋白注入宿主细胞.
• T3SS效应器操纵宿主过程并抑制免疫力,帮助病原体的殖民化和毒性.
• 准确检测T3SS介导的转位对于理解病变发生至关重要.

研究的目的:

• 开发一种快速,定量和简单的方法来检测T3SS介导的效应器转移.
• 为此目的,评估一个自组装的分裂纳米光酶 (Nluc) 报告系统的实用性.

主要方法:

• 工程化Pseudomonas注射器菌株,其效应器与C端的Nluc片段融合.
• 使用自组装的分割Nluc报告员系统进行体外和植物内检测.
• 在自然感染期间,在效应器转移到宿主细胞时评估的发光.

主要成果:

• 分裂的Nluc系统在体外检测效应器分泌物时表现出高灵敏度和信号对噪声比.
• 移位的效应剂在植物中保留了它们的毒性功能.
• 在受感染的植物细胞中观察到自发的Nluc组合和明亮的发光,证实了T3SS活动.

结论:

• 自组装的分割Nluc报告员系统为检测T3SS介导的效应器转移提供了一个有效的工具.
• 这种系统可以直接和快速地评估在体外和植物中的效应器传递.
• 开发的方法适用于研究细菌病原和T3SS功能.